Анф 1 160

Содержание

Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках, IgG

Общая информация об исследовании

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U3RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.

Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.

Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.

У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.

В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
  • Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
  • Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
  • Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышение температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
  • При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).

Антинуклеарный фактор (АНФ)

Давно я хотела написать про антинуклеарный фактор, но меня все время что-то останавливало. Почему? Ну потому что писать об этом — это пытаться объять необъятное, а краткость — явно не сестра моего таланта)))

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) -основной метод выявления антинуклеарных антител, который позволяет выявить большинство разновидностей антинуклеарных антител. Результатом определения АНФ является сам факт присутствия аутоантител, конечный титр разведения сыворотки и тип свечения ядра клетки.

АНФ-это не одно антитело!

Метод выявления АНФ был разработан Таном (1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (вы могли видеть это название в бланке анализа). Это клеточная линия получена из опухоли гортани человека (аденокарциномы). Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ) с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ.

В качестве субстратов могут применяться и другие клеточные линии (см карусель), однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линия Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. В англоязычной литературе иногда этот метод обозначают как FANA(Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).

Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории называют тесты, как основанные на методах иммуноферментного и иммунохимическом анализе, так и метод иммунофлюоресценции.
Антинуклеарный фактор (АНФ) — это антитела, обнаруженные иммунофлюресцентным методом.
Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленных другими классами иммуноглобулинов не имеет самостоятельного значения.

Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, которое обладает четкой флюоресценцией (свечением) ядер клеток. При использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80, в этом случае в норме титры АНФ менее 1:160. Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом х2 (1:160-1:320 — 1:640 — 1:1280 – 1:2560 – 1:5120 и т.д.).

На фоне обострения заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры могут снижаться до 1:160-1:320.

Балльная оценка результатов выявления («в крестах» +++) позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным❌

Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнять присутствие в сыворотке аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.

ТИПЫ СВЕЧЕНИЯ ЯДРА

Тип свечения ядра — одна из ключевых характеристик при выявлении АНФ. Каждая разновидность антинуклеарных антител (ANA) имеет конкретные мишени в клетке и отражает взаимодействие сыворотки больного с структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в крови, на основе чего, можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей антител, которые имеются в данной сыворотке. Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ.

Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, однако для клинической практики достаточно выделить основные. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с теми антигенами, которые распределены в ядре диффузно, т.е. входят в состав хроматина.

За счёт чего? Антитела против нуклеосом, ДНК, гистонов.

Когда? У больных с СКВ и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией.

Часто обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз СКВ.

Периферический тип свечения могут выделять отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно при СКВ, заболеваниях печени.

Гранулярный тип (крапчатый, сетчатый) является наиболее частым встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим.

За счёт чего? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA.

Когда? СКВ, болезнь/синдром Шегрена, склеродермия, дерматомиозит/полимиозит, РА и ряда других болезней. Низкие титры (1:160-1:320) АНФ с гранулярным типом свечения могут быть в сыворотках крови у клинически здоровых лиц БЕЗ признаков системного заболевания.

Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз смешанного заболевания соединительной ткани и требует дообследования для выявления RNPантигена.

Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции.

За счёт чего? PHК полимераза 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.

Когда? Склеродермия и ее разновидности.

Центромерный тип отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST-синдроме (вариант склеродермии).

Цитоплазматический тип свечения.

За счёт чего? Антитела к тРНК–синтетазам, в частности Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: при аутоиммунном гепатите, при первичном билиарном циррозе.

Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения. Антитела к Scl-70 дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 — светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках.

Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70.

Иногда в низких разведениях преобладает один тип свечения, например гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА.

Что такое анализ крови на АНФ

Иммунная система человека – уникальный слаженный механизм, способный реагировать на любые внешние внедрения патогенных факторов, тем самым защищая организм от целого ряда заболеваний. Но как известно, из каждого правила есть исключения, и в данном случае они выглядят как реагирование иммунитета на собственные клетки, что получило название аутоиммунные болезни.

При данных патологиях идет выработка антител, атакующих здоровые клетки, поражая или уничтожая их. В результате происходит нарушение функционирования отдельных тканевых структур и даже органов. Такие патологии из-за своей распространенности и вовлеченности в процесс нескольких органов или систем получили название системных заболеваний.

При появлении современных методов лабораторной диагностики, одним из которых является АНФ анализ крови на поиск антинуклеарного фактора, позволяющий выявить антинуклеарные (антиядерные) антитела и определить причину патологии. Данный показатель является одним из маркеров системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ), принятым как «золотой стандарт» данного вида исследований.

Основные понятия, характеризующие СЗСТ

Как уже описывалось выше, патогенез данных патологий берет свое начало со сбоев функционала иммунной системы, и выработке защитных антител к определенным компонентам собственных клеток. Такие клетки за особенность своего происхождения имеют второе название – аутоантитела. В процессе иммунного сбоя они вступают в контакт с белковыми соединениями ядра, нуклеиновыми кислотами и антигенами цитоплазмы, что приводит к появлению симптомов воспалительных заболеваний, таких как:

  • структурные изменения тканей и органов;
  • выраженное необоснованное утомление;
  • болевые ощущения в мышцах и суставах;
  • поражение кожных покровов;
  • снижение веса тела и другие.

Антинуклеарные антитела (АНА) могут образовываться при довольно обширном спектре аутоиммунных патологий, но наибольшая вероятность их появления при системной красной волчанке (СКВ).

АНФ необходимо сдать при признаках длительного воспалительного процесса

Справка! По статистике, более чем у 90% пациентов, страдающих СЗСТ, определяется патологическая выработка подобных антител. На текущий момент изучено около 200 их видов, которые получили обобщенное название – антинуклеарный фактор. В основном они представлены иммуноглобулинами класса G, но иногда встречаются М или А.

Суть анализа крови на антинуклеарный фактор

Прежде чем углубляться в особенности проведения исследования на АНФ, стоит отметить, что методика была изобретена и начала применяться довольно давно – в 60-х годах прошлого века. Но широкое распространение в диагностической практике получила лишь в начале 80-х годов XX века после усовершенствования. В качестве субстрата еще в 1961 году ученый Beck применял клетки лабораторных животных, и только в 1982 году Tan воспользовался перевиваемой клеточной линией человека HEp-2 для поиска АНФ.

Хотя основная цель использования данного теста – это установление диагноза красная волчанка, все же он считается универсальной методикой и для других коллагенозов (СЗСТ). К последним относятся:

  • склеродермия;
  • дерматомиозит;
  • узелковый периартериит;
  • хронический активный гепатит и т. д.

Одной из наиболее удобных, и поэтому чаще всего используемых методик для определения в крови пациентов антинуклеарного фактора, считается непрямая иммунофлюорестенция. Исследование проводится при нанесении сыворотки крови на клетки перевиваемой эпителиоидной линии аденокарциномы гортани человека НЕр-2 (содержащих определенный ряд ядерных антигенов) с применением меченого коньюгата (соединения) с антителами.

Этот выбор сделан неслучайно – клетки НЕр-2 – очень удобный субстрат для изучения биоматериала. Они имеют довольно крупные ядра, и при высадке на лабораторных стеклах растут однослойно. В качестве субстрата можно использовать и другие клеточные линии человека, но удачная морфология и культивирование однозначно делает именно НЕр-2 – незаменимым материалом.

В ходе диагностики при инкубации сыворотки обследуемого с клеточным субстратом, при наличии АНА происходит их соединение с соответствующими нуклеарными антигенами. Места связки АНФ с НЕр-2 определяются при использовании меченого флюоресцеином (красителем) коньюгата. Для выполнения оценки результатов произошедших реакций применяется люминесцентный микроскоп, позволяющий дифференцировать характер и степень получившихся связок.

Люминесцентный микроскоп для лабораторных исследований АНФ

Справка! HEp-2 человека, в отличие от тканевых криосрезов животных, имеют более высокую скорость деления клеток, что дает возможность обнаружить антитела к антигенам, которые экспрессируются лишь при делении. Также в субстрате человека отсутствует клеточный матрикс, снижающий качество визуализации изучаемого свечения.

Какие группы антигенов используются при исследовании?

При расшифровке материалов всегда необходимо брать во внимание, что в спектр АНА входит довольно большая группа аутоантител к нуклеопротеидам, рибонуклеопротеидам, гистонам, ДНК и другим структурным единицам ядра. Из этого следует, что функционал теста направлен на выявление антител к составляющим ядра и цитоплазмы, которые изначально были определены при СКВ.

Позже диагностические возможности исследования были расширены, что обусловлено определением подобных антител при других СЗСТ. В скрининговых методиках для обнаружения суммарных АНА, как правило, применяется определенный набор антигенов, принятых за основные маркеры аутоиммунных ЗСТ.

К ним относятся антитела класса IgG:

  • SS-A (Ro) – ядерные рибонуклеопротеины;
  • SS-B (La) – ядерные белки;
  • Scl-70 – белок-фермент (топоизомераза-1);
  • нативная двухцепочная ДНК;
  • RNP/Sm – комплекс антигенов;
  • Jo-1 – фермент РНК – синтетаза;
  • CENP-B (центромера)
  • Hep-2 клетки;
  • митохондрии (PDC).

АНА практически безвредны для организма – они не способны проникать в живые ткани. Но в отдельных случаях могут соединяться в комплексы антиген-антитело, что в результате приводит к структурным разрушениям тканей. Одним из таких примеров является поражение паренхимы почек при СКВ. Так как при СЗСТ в процесс вовлечено несколько органов, то выявление АНА не является первостепенно важным для диагностики, а считается лишь подтверждением определенной симптоматики.

Возможности анализа АНФ, выраженные в процентном соотношении

Изучение полученных результатов

После проведения всех необходимых процедур – взятия биоматериала и его лабораторной подготовке к исследованию, проводится оценка и интерпретация результатов. Сюда входит определение титра (концентрации) антител и типа свечения. Значимым параметром для диагностики является показатель концентрации свыше 1:160. К примеру, при обострении ревматизма он может превышать отметку 1:640, тогда как в ремиссионном периоде наблюдается понижение до 1:160–1:320.

Тип свечения показывает мишени АНА, что является особо важным клиническим моментом, направляющим последующие действия врача в назначении диагностических мероприятий. По характеру свечения ядер при использовании НЕр-2 определится свыше 20 вариантов ядерного окрашивания, в зависимости от видов присутствующих антител в биоматериале. К основным из них относятся следующие типы свечения.

  • Периферическое. Свечение свидетельствует о наличии анти-ДНК-антител, что подтверждает СКВ. Основным видом антигенов для периферического типа являются гистоновые белки и ДНК.
  • Диффузное (гомогенное). Такое свечение наблюдается при СКВ, сопровождающейся поражением структуры почек и похожих ЗСТ, нефрите, склеродермии, а также лекарственно-индуцированной СКВ. Антигены при данном типе представлены дсДНК, гистонатами и нуклеосомами.
  • Ядрышковое (нуклеарное). Данный тип характерен для системной формы склеродермии, и определяется при присутствии у пациентов антител – PHК полимераза 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
  • Цитоплазматическое. Подобный тип подсвечивания указывает на наличие АНА к тРНК–синтетазам, а именно Jo-1, и наблюдается при полимиозите.
  • Гранулярное. Определяется при синдроме Шегрена, инфекционном мононуклеозе, смешанном ЗСТ (Sharp-синдром, MCTD) и лекарственном волчаночном синдроме. Преимущественно присутствующие антигены для этого типа – SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP, и PCNA.
  • Крупногранулярное. Характерно для смешанных ЗСТ и, по мнению многих ученых, связано с наличием антигена RNP.
  • Мелкогранулярное. Определяется присутствие антител, образующихся против рибонуклеиновых белков – АSSP (АЦЦП), SS-A, SS-B и других. Такие антитела характерны для СКВ, также ее специфических кожных формах, ревматоидном артрите, склеродермии, полимиозите, синдроме Шегрена.
  • Центромерное. Данный тип в основном отмечается при склеродермии. Хотя в одном образце крови, особенно у обследуемых с диффузными ЗСТ, в отделенной плазме могут определяться антитела к различным ядерным компонентам.
  • Точечные вкрапления в ядре. Этот тип преимущественно выявляется при болезнях печени аутоиммунного характера. При нем могут сочетаться несколько флюоресцентных типов, к примеру, ядрышковый и мелкогранулярный, что обусловлено антителами к Scl-70.

Справка! Отмечено, что при увеличении разведения плазменного биоматериала параметры свечения могут видоизменяться, так как для многих антител характерна смена активности при разной степени концентрации.

Факторы, способные исказить результаты

На достоверность полученных в ходе исследования данных могут повлиять всего несколько факторов, способных показать и ложноположительный и ложноотрицательный результат. Так, неправдоподобные ответы со сдвигом вверх наблюдаются у пожилых пациентов в возрасте от 60 лет (по статистике в 10–37% случаях) и при приеме медпрепаратов, вызывающих лекарственную волчанку (некоторые антибиотики, контрацептивы, сульфаниламиды, тиазидные диуретики).

Отмечено, что у 5–55% особ женского пола, имеющих грудные имплантаты, повышается уровень концентрации АНА. К ошибочной диагностике со сдвигом вниз может привести употребление глюкокортикоидных препаратов – Преднизолона, Метипреда или Дексаметазона.

Антинуклеарный фактор (АНФ) и антитела (АНА): понятие, исследование и показания к нему, причины обнаружения

З. Нелли Владимировна, врач лабораторной диагностики, квалификация по иммунодиагностике

Открытие антинуклеарных антител (АНА), вошедшее в число главных достижений иммунологической науки, дало клинической лабораторной диагностике новые возможности для выявления ряда патологических состояний. Анализ крови, определяющий антинуклеарный фактор (АНФ), входит в группу наиболее востребованных серологических исследований и находится в числе «золотых стандартов» диагностики аутоиммунных процессов, которые приводят к развитию системной патологии соединительной ткани. Данный тест при наличии подозрительных симптомов позволяет регистрировать изменения соединительной ткани на самой ранней стадии патологического (аутоиммунного) процесса.

Антинуклерные антитела

Системные заболевания соединительной ткани (СЗСТ) возникают на почве агрессии иммунной системы против собственных антигенов (аутоантигенов), что сопровождается выработкой аутоантител.

Аутоантитела, направленные против растворимых компонентов клеточного ядра (рибонуклеопротеинов), составляют целое семейство (более 200 разновидностей) антинуклеарных (антиядерных) антител (АНА). Семейство это носит название – антинуклеарный фактор или АНФ, хотя, следует заметить, с названиями иной раз возникает путаница, поскольку все же под термином «антинуклеарный фактор» подразумевают исследование сыворотки, обнаруживающее антинуклеарные антитела с участием метода непрямой иммунофлюоресценции (см. ниже).

И все же в настоящее время чаще принято говорить об антинуклерных антителах и методах их обнаружения. В норме АНА в организме не образуются, поэтому и нормы, как таковой, не существует.

Антинуклеарные антитела легко вступают во взаимодействие со всеми составляющими структурами клетки, запуская воспалительные реакции в органах и тканях, что отражается на их функциональных способностях. Естественно, у всех аутоиммунных заболеваний можно найти общие симптомы:

  • Суставные и мышечные боли;
  • Слабость;
  • Снижение массы тела;
  • Поражение кожных покровов.

Однако при этом каждая аутоиммунная болезнь наделена и своими специфическими симптомами.

Чаще всего антинуклеарный фактор назначается и выявляется в высоких титрах при системной красной волчанке (СКВ), присутствуя в сыворотке крови почти у всех пациентов (более 90%). Однако сам позитивный ответ теста не доказывает формирование патологии, у людей здоровых людей, превосходно себя чувствующих, титр тоже может быть несколько повышен. В данном случае специалист, который проводит исследование, определяет мишени АНА, чтобы впоследствии разработать правильную тактику в плане обследования пациента.

Таблица: встречаемость антинуклеарных антител при различных заболеваниях

Расшифровку исследования проводит специалист в области иммунологии (реже – ревматологии), который хорошо ориентируется в механизме образования антител и может провести дифференциальную диагностику, если в этом возникает необходимость. Для данного анализа самодеятельность абсолютно неуместна.

Причина назначения анализа и факторы, влияющие на результат

Как выше сказано, поиск АНФ в первую очередь находится в зоне внимания иммунолога и ревматолога, правда, врачи других специальностей тоже иной раз проявляют интерес к данному исследованию, однако он уже не столь велик, поскольку назначается тест, прежде всего, в случаях:

  1. Появления симптомов, указывающих на развитие аутоиммунного процесса, затрагивающего соединительную ткань (лихорадка в течение длительного периода, не отступающие суставные боли, снижение работоспособности, похудение, изменения со стороны кожи);
  2. Необъяснимого повышения показателей общего и биохимического анализа крови (увеличения СОЭ, концентрации СРБ – C-реактивного белка, и ЦИК – циркулирующих иммунных комплексов).

Врачи, занятые в области иммунологии и ревматологии используют исследование для:

  • Диагностики системной патологии соединительной ткани;
  • Дифдиагностики ряда ревматологических заболеваний, симптомы которых, как правило, схожи, но лечение – отличается;
  • Оценки эффективности проводимого лечения системных заболеваний соединительной ткани;
  • Мониторинга течения аутоиммунных процессов.

В иных случаях могут «выскакивать» ложноположительные или ложноотрицательные результаты.

Ложный плюс можно ожидать у пациентов:

  1. После 60-летнего возраста (до 35% случаев);
  2. Принимающих фармацевтические средства, которые при длительном применении сами по себе способны дать старт развитию системной красной волчанки. К ним относятся: некоторые антибиотики, сульфаниламиды, мочегонные группы тиазидов, гормональные противозачаточные средства, соли золота и лития, отдельные гипотензивные и многие другие препараты.

Наоборот, ложный минус можно получить при использовании таких гормонов, как дексаметазон, преднизолон, метипред (метилпреднизолон).

Следует заметить, что:

  • Разновидность болезни (системной красной волчанки) может быть АНФ-негативной (5%), поэтому при наличии симптомов данной патологии и отрицательном АНФ требуется дополнительное исследование – выявление АТ к SS-антигенам;
  • Нельзя воспринимать положительный результат, как неопровержимое доказательство заболевания – в сыворотке 5 – 10% здоровых людей описываемый показатель может быть повышен;
  • Полученные в ходе исследования результаты рекомендуется сопоставлять с данными клинической симптоматики и других лабораторных тестов – только комплексный подход способен установить точный диагноз;
  • В случае позитивного результата, полученного любым методом, необходимо подтверждение специфичности антинуклеарных антител иммуноблоттингом.

Хотя не особо мнительные люди, случайно пройдя подобное тестирование, могут не придавать своим результатам большого значения, продолжая жить полноценной активной жизнью. Конечно, если не жалуются на свое здоровье. А вот мнительные… Они – наоборот, могут даже и симптомы у себя найти, поэтому подобный анализ крови должен осуществляться только по назначению иммунолога, а не по собственной инициативе пациента.

Методы выявления АНА

Иммунологическая наука к изучению антинуклеарного фактора вплотную подошла к середине прошлого века, а с 1982 года, когда впервые была использована перевиваемая клеточная линия человека HEp-2, ставшая золотым стандартом обнаружения АНА, стали активно дорабатываться и добавляться другие методы. Сейчас иммунология и КДЛ используют несколько методик.

Метод непрямой иммунофлюоресценции, разработанный в самом начале 80-х (1982), на сей день считается наиболее популярным и доступным. Он предполагает участие HEp-2-клеток, извлеченных из опухоли гортани человека. Для определения АНФ выявляются иммуноглобулины класса G (IgG), ибо представители иных классов особой роли не играют. Основа метода – соединение АНА с конкретными ядерными мишенями. Исследование проходит под люминесцентным микроскопом. Расшифровка анализа проводится на основании полученных данных – тип свечения, титр АНА (норма – титр менее 1:160).

Рисунок: типы свечения и диагностические выводы

Метод двойной иммунодиффузии (качественный анализ) требует большой концентрации АНА, поэтому он менее чувствительный, нежели предыдущий метод. Однако данный недостаток с лихвой компенсируется высокой специфичностью. К тому же, он простой, в какой-то специальной аппаратуре не нуждается, как и в применении антигенов высокой очистки. Разновидность иммунодиффузии – контрэлектрофорез также является качественным методом, позволяющим увеличить чувствительность и сократить время проведения исследования.

Иммуноферментный анализ (ИФА) обладает высокой чувствительностью, обеспечивая быстрый и надежный количественный результат в лабораториях небольших медицинских учреждений. Но при всех достоинствах у иммуноферментного анализа тоже есть свои недостатки: он требует контроля качества, поскольку стандартизация тест-систем и отображаемость результатов основаны на качестве данного исследования.

Возможности иммуноблоттинга в плане чувствительности и специфичности превосходят способности всех предыдущих методов. Он отличается умением выявлять сывороточные АТ к антигенам определенного молекулярного веса, что позволяет не только найти редко встречающиеся антинуклеарные антитела, но и дать им полную характеристику. И еще чем хорош иммуноблоттинг: он не нуждается в высокоочищенных антигенах и не требует контрольных и референсных реагентов. Но и этот метод, не глядя на свое превосходство над остальными, рекомендуется использовать не в изолированном виде, а вместе с другими методами (с целью повышения чувствительности).

Когда АНФ повышен

Преимущественно, в уточнении АНФ проявляет потребность подозрение на системную красную волчанку. Между тем, он повышен и при развитии других аутоиммунных состояний, кстати, иногда очень напоминающих СКВ, например:

  1. Наиболее распространенной разновидности красной волчанки – дискоидной форме, главными симптомами которой выступает поражение кожных покровов и слизистых оболочек. Эту форму нередко связывают с воздействием солнечных лучей, низких температур, инфекции, хотя причина ее остается невыясненной;
  2. Лекарственной волчанке, возникающей на фоне применения отдельных групп фармацевтических препаратов (антиаритмических, гипотензивных, противотуберкулезных, антибактериальных, противосудорожных и др.);
  3. Системной склеродермии, возникающей по неизвестным причинам, сопровождающейся разрастанием соединительной ткани (фиброз) с образованием рубцов, которые нарушают функционирование многих органов, а также поражением сосудистого русла на различных участках;
  4. Синдроме Шегрена, который, помимо того, что относится к СЗСТ, в числе симптомов имеет патологические изменения желез внешней секреции (преимущественно – слезных, слюнных);
  5. Синдроме Рейно, характеризующемся неадекватной реакцией (спазмом) сосудов в ответ на холод либо психоэмоциональное напряжение;
  6. Синдроме Шарпа, называемом смешанным заболеванием соединительной ткани;
  7. Ревматоидном артрите, что, в общем-то, понятно, ведь это тоже системная аутоиммунная патология;
  8. Патологических изменениях соединительной ткани диффузного характера – ДЗСТ (полимиозит);
  9. Туберкулезном процессе;
  10. Миастении с тяжелым течением;
  11. Васкулитах в стадии некротизирующего воспаления;
  12. Инфекционном мононуклеозе;
  13. Инфекционном эндокардите;
  14. Поражениях печени: хроническом гепатите аутоиммунного происхождения, биллиарном циррозе (первичном);
  15. Лейкозе, лимфоме и злокачественных опухолях других локализаций;
  16. Интерстициальных болезнях легких – ИБЛ (межуточном легочном фиброзе, рентгенологически и морфологически – «сотовое легкое»);
  17. Необратимых поражениях легких, связанных с профессиональной деятельностью (пневмокониоз).

Но лишь полное, всеобъемлющее обследование пациента может установить малоутешительный диагноз, с которым придется бороться всю дальнейшую жизнь. Или опровергнуть его.

АНФ, симптоматика и прочие лабораторные тесты

Позитивный антинуклеарный фактор обычно предполагает проведение ряда других лабораторных исследований. Конечно, не обходится без общего анализа крови (ОАК), в котором основное внимание направлено на изменение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) – она находится под постоянным контролем (анализ пациенты сдают чаще, нежели сам ОАК). Периодически контролируется РФ (ревматоидный фактор), СРБ (С-реактивный белок – в количественном выражении), АСЛО (антистрептолизин О), антитела к кардиолипиновому антигену (IgG и IgM). Кроме этого, пациенту могут назначаться и более сложные тесты:

  • Скрининговые исследования, направленные на поиск АТ к двухнитевой ДНК (анти-dsDNA), к ядерным антигенам (ANA), к экстрагируемому ядерному антигену, то есть, к различным рибонуклеопротеинам (ENA-скрин);
  • Поиск антинуклеарных антител – IgG с помощью иммуноблоттинга (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2);
  • Определение содержания ЦИК (циркулирующих иммунных комплексов);
  • Исследование компонентов комплемента (С3 и С4).

Очевидно, как антинуклеарный фактор, так и все АНА могут появляться при многих и, следует заметить, довольно не простых патологических состояниях, поэтому и назначаются эти анализы крови только врачом, способным расшифровать и интерпретировать полученный результат. Само исследование обычно не требует особой подготовки (как любой биохимический тест), кроме того, что пациент должен предупредить, какие лекарственные средства он принимает, чтобы врач обозначил время, когда можно сдавать анализ. И еще: курящим пациентам за полчаса до отбора проб настоятельно рекомендуется расстаться со своей привычкой.

Видео: специалист об антиядерных антителах – основное

В данный момент на вопросы отвечает: А. Олеся Валерьевна, к.м.н., преподаватель медицинского вуза

В медицине различают специфические состояния, при которых защитные клетки начинают атаковать собственный организм, — аутоиммунные заболевания. Большинство таких болезней протекают в хронической форме и являются потенциально опасными, так как способны вызвать серьезные проблемы работы определенных органов и систем. Это нередко приводит к инвалидности и тяжелым последствиям.

Возможности современной медицины велики, и выявить все эти изменения удается на ранней стадии и своевременно начать лечение. Одним из самых частых исследований, которые применяются для диагностирования этих состояний, служит анализ на антинуклеарные антитела, сокращенно АНА.

Описание

Анализ АНА — это самый информативный метод постановки диагноза при подозрении на любые аутоиммунные расстройства, в основном, это заболевания соединительной ткани. Но встречаются также наличие антител при злокачественных процессах, инфекционных и т.д.

Самая большая чувствительность антител к таким недугам:

  1. Системной красной волчанки.
  2. Ревматоидному артриту.
  3. Болезни Шегрена.

Эти клетки могут быть обнаружены также примерно у трети пациентов, страдающих хронической формой гепатита.

На увеличение показателей влияют разные факторы. В частности, малярия, лейкоз, инфекционный мононуклеоз и многое другое.

Секреты лечения суставов лазером

Вместе с выявлением АНА при выполнении исследования важно оценить уровень содержания таких иммуноглобулинов, как IgA, IgM, IgG. Выявление данных составляющих в крови у пациентов может указывать на большие шансы появления ревматических патологий и коллагенозов.

Если же взаимосвязь между содержанием антител и симптомами не была выявлена, само наличие АНА в крови указывает на выбор правильной тактики лечения. Длительное сохранение высоких титров говорит о неутешительном положении дел. Понижение этих титров говорит о ремиссии патологии, гораздо реже о скорой смерти.

Вместе с тем данные антитела могут быть выявлены у определенного процента здоровых лиц и титры АНФ могут выходить за пределы нормы.

Показания к проведению исследования

Трактовать результаты вправе врач иммунолог и любой дипломированный специалист, в зависимости от области поражения.

Показаниями для проведения данного исследования служат:

  1. Выявление системных заболеваний, а также аутоиммунных нарушений без явных симптомов.
  2. Обнаружение системной красной волчанки и ее комплексное исследование, подбор стратегии лечения.
  3. Выявление лекарственной волчанки.
  4. Наличие определенных клинических проявлений, таких как, длительная лихорадка без явной на то причины, ломкость суставов и их болезненность, кожная сыпь, ломота мышц, высокая степень утомляемости.
  5. Признаки симптоматических проявлений смешанных заболеваний: болезни кожи и внутренних органов, судорожные состояния, увеличение температурных показателей.
  6. Назначение медикаментов дизопирамид, гидралазином и прочее.

Виды обследования

Обнаружить антитела в крови удается двумя способами. Первая методика называется непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия. При наличии антител они будут связываться со специфическими ядерными антигенами. Используются элементы, которые светятся в отдельном световом спектре. Под микроскопом появляется возможность выявления типа свечения.

Подробнее про то, что такое миофасциальный синдром и как его лечат читайте тут.

Этот способ признан самым лучшим для определения значения антинуклеарных антител. Также методика получила второе название — волчаночные тест-полосы. Вторым методом диагностирования выступает ферментный иммунный анализ. Его смысл заключается в том, что антитела, находящиеся в крови, попадают во взаимосвязь с антигеном и в итоге раствор меняет свой оттенок.

Важно подчеркнуть, что положительный скрининг не может быть единственным поводом для постановки диагноза.

Обязательно назначается дополнительное исследование, с помощью которого удается определить недуг на ранней стадии. В случае отрицательного скрининга можно предполагать полное отсутствие нарушений. Однако и это вовсе не исключает наличия у пациента аутоиммунного заболевания.

Сдается кровь на антинуклеарный фактор совместно с другими анализами. Но на конечный результат оказывает влияние прием некоторых медикаментов и наличие у пациента патологий хронического и острого течения. Разобрать все эти моменты поможет специалист, затем установит верный диагноз и посоветует, как поступить дальше.

Как правильно подготовиться к исследованию

Материалом для анализа выступает венозная кровь.

Особенности подготовки:

  1. Материал берут на голодный желудок. После последней трапезы должно пройти, как минимум, 8 часов. Допустимо пить качественную фильтрованную воду без газа.
  2. Предварительно за два часа перед забором крови исключается курение и использование никотиновых продуктов.
  3. За несколько дней до совершения манипуляции исключается потребление спиртных напитков и энергетиков, запрещено заниматься тяжелым физическим трудом.
  4. За две недели должен полностью исключаться прием фармацевтических средств, в частности, гормонов, антибиотиков и прочих медикаментов.
  5. В целях подтверждения исследования важно повторить скрининг через две недели.

Ожидайте результатов в течение 48 часов после процедуры. Возможно получение данных в экстренном порядке в течение 3 часов.

Трактовка результатов

При качественном исследовании могут быть получены такие результаты:

  • ниже 0,9 —отрицательный, норма,
  • значения от 0,9 до 1,1 — сомнительный,
  • свыше 1,1 — позитивный.

Пациенты часто задают вопрос: антинуклеарный фактор 1:160 норма или нет? Все, что выше этого показателя, выходит за пределы нормы.

: Как лечить эпидурит позвоночника

Стоит также учитывать, что неправильная подготовка и некоторые нюансы могут повлиять на результаты:

  1. Нарушение принципов подготовки.
  2. Несоблюдение правил алгоритма инъекции медицинским специалистом.
  3. Прием определенных фармацевтических средств.
  4. Диагноз уремия может также исказить результаты.

Положительный скрининг на антиядерные антитела может говорить о наличии таких недугов, как красная волчанка, патология поджелудочной железы, наличие нарушений функциональности щитовидной железы, патологии печени, синдром Шегрена, поражение тканей легких, суставов и многое другое. Только доктор может интерпретировать результаты и назначать дальнейшее лечение.

В ходе расшифровки данного исследования стоит учитывать, что в случае отрицательных значений вероятность наличия недуга не исключается.

Как применять крем Алезан для суставов подробно описано тут

Если скрининг на данные антитела положительный без сопровождающейся симптоматики, необходимо пройти более тщательное обследование.

Из этой статьи вам стало известно, для чего берется кровь на анализ АНФ и что это такое. Не все антитела могут быть обнаружены при проведении данного исследования в силу их изобилия. Чтобы свести к минимуму возможность появления недостоверных результатов необходимо провести комплексное исследование совместно с другими методами.

Отсутствие высоких титров АНФ вовсе не говорит об отсутствии у пациента системных заболеваний, точно так же, как и положительный результат не может быть однозначным аргументом для постановки диагноза.