Антитела к тромбоцитам

Антитела к тромбоцитам, IgG

Определение в крови антител к антигенам тромбоцитов, используемое для дифференциальной диагностики геморрагического синдрома и тромбоцитопении.

Синонимы русские

Антитела к гликопротеинам тромбоцитов, антитела при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре.

Синонимы английские

Anti-platelet antibodies, Platelet Abs.

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Антитела к тромбоцитам могут быть обнаружены при многих заболеваниях, в том числе при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, аллоиммунной тромбоцитопении новорождённых, системной красной волчанке (СКВ), бактериальных и вирусных инфекциях (ВИЧ, инфекционный мононуклеоз, сепсис), а также при приеме некоторых лекарственных средств. В настоящий момент описано несколько антигенов-мишеней для этих антител, в том числе гликопротеины GPIIb/IIIa, GPIb/IX, GP5 и рецептор тромбопоэтина.

Наличие антител к тромбоцитам связано как с количественными, так и с качественными изменениями тромбоцитов. С одной стороны, взаимодействие антител с антигенами приводит к разрушению тромбоцитов клетками ретикулоэндотелиальной системы в селезенке (и в меньшей степени в печени) и возникновению тромбоцитопении. С другой стороны, антитела, блокирующие гликопротеины тромбоцитов, нарушают процесс дегрануляции и адгезии тромбоцитов, в результате чего развивается тромбоцитопатия. Клиническим проявлением тромбоцитопении и тромбоцитопатии является повышенная кровоточивость разной степени выраженности – от незначительной петехиальной сыпи до обширного внутримозгового кровоизлияния.

Ведущее значение в диагностике заболеваний, протекающих с геморрагическим синдромом, принадлежит лабораторным методам. Антитела к тромбоцитам – один из тестов, входящих в алгоритм дифференциальной диагностики геморрагического синдрома. Этот тест имеет особое значение в следующих клинических ситуациях:

  1. При подозрении на сочетание аутоиммунной тромбоцитопенической пурпуры и заболеваний костного мозга. У пациентов с нарушенным тромбоцитопоэзом (например, при хроническом лимфолейкозе) наличие антител к тромбоцитам может ухудшать уже имеющуюся тромбоцитопению. Обнаружение антител к тромбоцитам в такой ситуации свидетельствует о том, что причиной тромбоцитопении является не только инфильтрация костного мозга опухолевыми клетками, но и аутоиммунное разрушение тромбоцитов, что имеет значение для выбора тактики лечения. Еще одним клинико-лабораторным признаком аутоиммунной тромбоцитопении является реактивный мегакариоцитопоэз в костном мозге.
  2. При наличии идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, резистентной к препаратам первой и второй линии терапии. Пациентам, получающим лечение препаратами 3-й линии терапии, рекомендуется повторное определение антител к тромбоцитам и количества тромбоцитов для оценки эффективности лечения.
  3. Лекарственная тромбоцитопения. Применение многих лекарств ассоциировано с развитием тромбоцитопении. Для некоторых из них (гепарин, хинин/хинидин, тейкопланин) доказана аутоиммунная природа лекарственной тромбоцитопении. При возникновении тромбоцитопении на фоне приема одного из этих лекарственных препаратов анализ на антитела к тромбоцитам может быть необходим для решения вопроса о прекращении лечения этим препаратом.

Следует отметить, что исследование на антитела к тромбоцитам не является рутинным тестом при подозрении на идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, что связано в основном с его недостаточной специфичностью в отношении этого заболевания.

В настоящее время исследование на антитела к тромбоцитам – это дополнительный метод диагностики геморрагического синдрома и тромбоцитопении. Результат анализа оценивают с учетом данных других лабораторных исследований, в первую очередь коагулограммы.

Для чего используется исследование?

  • Для дифференциальной диагностики геморрагического синдрома и тромбоцитопении.

Когда назначается исследование?

  • При наличии геморрагического синдрома, в первую очередь петехиально-пятнистого типа (петехиальной сыпи, рецидивирующих носовых кровотечений, меноррагий, повышенной кровоточивости десен);
  • при обнаружении в клиническом анализе крови тромбоцитопении.

Что означают результаты?

Референсные значения

Титр:

Результат: отрицательный.

Положительный результат:

  • идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура;
  • аллоиммунная тромбоцитопения новорождённых;
  • системная красная волчанка;
  • ВИЧ-инфекция;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • сепсис;
  • применение лекарственных средств (гепарин, хинин/хинидин, тейкопланин).

Отрицательный результат:

  • норма.

Что может влиять на результат?

  • Прием лекарственных средств;
  • наличие сопутствующих заболеваний.



Важные замечания

  • В настоящее время исследование на антитела к тромбоцитам не является рутинным тестом при подозрении на идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру;
  • результат анализа оценивают с учетом данных анамнестических, клинических и других лабораторных исследований.

Также рекомендуется

  • Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)
  • Коагулограмма №1 (протромбин (по Квику), МНО)
  • Коагулограмма №2 (протромбин (по Квику), МНО, фибриноген)
  • Коагулограмма №3 (протромбин (по Квику), МНО, фибриноген, АТIII, АЧТВ, D-димер)

Кто назначает исследование?

Гематолог, терапевт, врач общей практики.

Литература

Анализ крови на АТ ТПО

Просмотров: 27

Когда организм человека атакует какая-либо инфекция, иммунная система начинает активно синтезировать антитела, способные распознать и уничтожить чужеродные микроорганизмы. В некоторых патологических ситуациях антитела начинают атаковать здоровые клетки, принимая их за инородные, результатом может стать развитие аутоиммунных или системных заболеваний.

Что такое АТ ТПО?

АТ ТПО – антитела к тиреоидной пероксидазе. Любой тип антител (иммуноглобулинов) – белковые молекулы, синтезирующиеся иммунной системой для защиты от чужеродных вирусов и бактерий. В конкретной ситуации воздействие антител нацелено на тиреоидную пероксидазу и тиреоглобулин. Исследование крови на ТПО позволяет определить повышенное содержание таких антител и своевременно предотвратить развивающуюся патологию в иммунной системе.

Тиреоидная пероксидаза (тиреопероксидаза) — гормон, отвечающий за выработку активной формы йода, необходимого для полноценного синтеза Т3 и Т4.

Норма антител к ТПО

Повышенная концентрация иммуноглобулинов к тиреоидной пероксидазе – довольное редкое явление и встречается оно примерно у 7% людей. Уровень антител стабилен и не зависит от пола человека, лишь с возрастом может наблюдаться незначительное превышение их количества.

Возраст Норма
До 50 лет, не зависимо от пола 0 – 34,9 ед/мл
После 50 лет, не зависимо от пола 0 – 99,9 ед/мл

Допускается превышение концентрации антител в сыворотке крови до 20 ед/мл, такие случаи не считаются патологическими и не требуют медикаментозного вмешательства, необходим лишь контроль. Повышение показателя более чем на 25 ед/мл уже считается поводом для более детального обследования пациента и терапевтического лечения.

Чаще всего повышение уровня АТ ТПО наблюдается у женщин, поэтому им необходимо периодически контролировать концентрацию антител к тиреопероксидаза. Особенно важно сдать анализ во время беременности, сильно завышенный показатель может стать причиной самопроизвольного прерывания беременности и рождения ребенка с какими либо отклонениями. Норма антител в крови беременной женщины должна быть ≤ 2,6 мМе/мл.

Кому необходимо сдать анализ на АТ ТПО?

Независимо от возраста и половой принадлежности пациента, анализ на антитела к тиреоидной пероксидазе назначают:

  • при подозрении на системные (аутоиммунные) заболевания;
  • при подозрении на гипотиреоз и тиреотоксикоз;
  • при увеличении щитовидной железы, выявленном пальпически или при помощи УЗИ;
  • во время беременности, причем анализ может назначаться неоднократно.

Подготовка к исследованию крови на АТ ТПО

Кровь на антитела сдают в утренние часы, преимущественно до 10 часов, строго натощак. За 1-2 часа до забора крови врачи рекомендуют воздержаться от курения. За 1-2 дня необходимо исключить тяжелую пищу и алкоголь, во возможности снизить физическую нагрузку.

Отклонение от нормы

Поскольку отсутствие антител в крови является нормой, патологией может считаться только превышение верхней границы (34,9 ед/мл у пациентов до 50 лет и 99,9 ед/мл после). Увеличение концентрации АТ ТПО может свидетельствовать о наличии целого ряда заболеваний:

  • болезнь Хашимото, представляющей собой тиреоидит в хронической форме;
  • болезнь Грейвса – токсический зоб диффузного характера;

болезнь де Кревена – тиреоидит в подострой форме;

  • токсический зоб узлового характера;
  • идиопатический гипотиреоз;
  • тиреоидит аутоиммунного характера;
  • сбой в работе щитовидной железы в постродовом периоде;
  • заболевания не тиреоидного типа аутоиммунного характера.

В некоторых случаях повышение концентрации антител к ТПО не связано с функцией щитовидной железы, тогда, с целью верно поставить диагноз, необходимы дополнительные исследования.

Дополнительная информация:

Анализ на АТ к тромбоцитам

Тромбоциты на своей поверхности несут определенные антигены, к которым могут вырабатываться антитела. Происхождение этих антител может быть различным – аутоиммунным (на собственные антигены) или аллоиммунным (на чужие антигены).
Тесты могут различаться – одни выявляют только аутоантитела, другие только аллоантитела, а третьи и то, и другое без разграничения. Как правило, все антитела образуются в селезенке, где и происходит дальнейшее разрушение тромбоцитов. Этот процесс происходит за счет фагоцитоза, то есть поглощения макрофагами селезенки самих тромбоцитов.
Антитромбоцитарные антитела могут встречаться при различных заболеваниях, к которым относят:

  • идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру;
  • аллоимммунную тромбоцитопению новорожденных;
  • тромбоцитопению после переливания крови;
  • системную красную волчанку;
  • ВИЧ-инфекцию;
  • инфекцию, вызванную вирусом Эпштейна-Бара и т.д.

Все антитромбоцитаррные антитела делятся на два класса:

  • иммуноглобулины G,
  • иммуноглобулины М.

Показания для проведения анализа на выявление антител к тромбоцитам

Анализ на выявление антител к тромбоцитам необходимо выполнить в каждом случае, когда имеется снижение уровня тромбоцитов в крови (менее 180 тыс/мл). С помощью этого анализа можно определить иммунное происхождение имеющейся тромбоцитопении.

Подготовка к исследованию

Специфической подготовки перед исследованием не требуется. Следует помнить, что накануне сдачи анализа между последним приемом пищи и забором материала должно пройти не менее 8 часов, а лучше – 12 часов. Из жидкостей можно употреблять только воду, так как употребление чая, кофе и сахаросодержащих напитков негативно отражается на результатах исследования.

В качестве биологического материала выступает венозная кровь, где и определяют уровень антител.

Интерпретация анализов

Показатели определяются в титрах. Титры менее 1:20 расцениваются как отрицательные. Это говорит о том, что в крови отсутствуют антитела к тромбоцитам.
В случае положительного результата анализа необходимо думать о наличии у пациента одного из следующих заболеваний:

  • тромбоцитопеническая пурпура (обычно у 90% больных этим заболеванием выявляют такие антитела);
  • посттрансфузионная пурпура;
  • антитела при системных заболеваниях и т.д.

>Повышены антитела к тромбоцитам>Похожие и рекомендуемые вопросы

Что делать, если у меня похожий, но другой вопрос?

Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос , или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос , и через некоторое время наши врачи на него ответят. Это бесплатно. Также можете поискать нужную информацию в похожих вопросах на этой странице или через страницу поиска по сайту . Мы будем очень благодарны, если Вы порекомендуете нас своим друзьям в социальных сетях .

Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 48 направлениям: аллерголога , анестезиолога-реаниматолога , венеролога , гастроэнтеролога , гематолога , генетика , гинеколога , гомеопата , дерматолога , детского гинеколога , детского невролога , детского уролога , детского хирурга , детского эндокринолога , диетолога , иммунолога , инфекциониста , кардиолога , косметолога , логопеда , лора , маммолога , медицинского юриста , нарколога , невропатолога , нейрохирурга , нефролога , онколога , онкоуролога , ортопеда-травматолога , офтальмолога , педиатра , пластического хирурга , проктолога , психиатра , психолога , пульмонолога , ревматолога , рентгенолога , сексолога-андролога , стоматолога , уролога , фармацевта , фитотерапевта , флеболога , хирурга , эндокринолога .

Мы отвечаем на 97% вопросов.

Антитела к тромбоцитам

Антитела к тромбоцитам — выявление специфических тромбоцитарных антител для дифференциальной диагностики геморрагического синдрома и тромбоцитопении.

Тромбоциты — это клетки крови, которые ответственны за свертывание крови. Наличие антител к тромбоцитам связано как с количественными, так и с качественными изменениями тромбоцитов.

Связывание циркулирующих тромбоцитов с антителами, направленными против антигенов, расположенных на их поверхности (наиболее часто это гликопротеины IIa-IIIb), приводит к их ускоренной элиминации селезёночными макрофагами посредством Fc-рецептор-опосредованного фагоцитоза. Связывание IgG с мембраной развивающихся тромбоцитов может в определённой степени нарушать мегакариоцитопоэз.

Антитела к тромбоцитам
Антитромбоцитарные антитела выявляются в крови при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, аллоиммунной тромбоцитопении новорожденных (более целесообразно исследование материнской сыворотки), посттрансфузионной пурпуре. Присутствие антитромбоцитарных антител может, кроме того, быть связано с имеющимся системным заболеванием (например, системная красная волчанка), инфекциями (например, ВИЧ, вирус Эпштейна-Барр), лимфопролиферативными и неопластическими заболеваниями. Выработка антитромбоцитарных антител может запускаться приёмом некоторых лекарственных препаратов (такие антитела связываются с тромбоцитами в присутствии этих препаратов).

У многих пациентов могут одновременно присутствовать разные типы антитромбоцитарных антител. Образование антитромбоцитарных антител, предположительно, происходит в селезёнке. В данном тесте исследуют специфическое связывание IgG иммуноглобулинов сыворотки пациента с препаратом аллогенных тромбоцитов, фиксированных на стекле.

Исследование выявляет наличие как аллоиммунных, так и аутоиммунных антител к тромбоцитам, без возможности их разграничить, и, таким образом, не обладает специфичностью, необходимой для дифференциальной диагностики иммунной тромбоцитопении и принятия соответствующих терапевтических решений. Результаты исследования следует интерпретировать в соответствии с клиническими наблюдениями, анамнезом, данными других лабораторных исследований, для исключения или выявления сопутствующих заболеваний и других причин тромбоцитопении.

Показания
При необходимости, в комплексе других исследований при диагностике иммунной тромбоцитопении — в случае подтверждённого в повторных исследованиях снижения числа тромбоцитов (на фоне отсутствия других отклонений при подсчёте форменных элементов крови по мазку) у больных без клинических проявлений других заболеваний или факторов, способных вызвать тромбоцитопению.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак или спустя 4–6 часов после последнего приема пищи. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Единицы измерения: титры.

Роль антител к тромбоцитам и причины их количественного отклонения от нормы

Работа кровеносной системы без сбоев – основа нормального функционирования человеческого организма. Тромбоциты – один из элементов крови, формируются в красном костном мозге и влияют на свертываемость крови. Развитие и жизнеспособность элементов варьируется в пределах 7-12 суток, после чего происходит распад в печени, селезенке либо легких. Нехватка или излишек тромбоцитов в костном мозге – показатель серьезных заболеваний в организме. В этом случае находящиеся на поверхности тромбоцитов антигены вызывают выработку антител, и происходит ускоренное разрушение данного элемента крови.

Функции и причины повышения количества антител

Основной задачей тромбоцитов, вырабатываемых костным мозгом, является питание внутренних стенок сосудов, остановка кровотечений. Антитела к тромбоцитам, вырабатываемые селезенкой, преследуют единственную цель: разрушение и удаление из организма чужеродного тела.

Нормальное развитие антител и выработка в нужном количестве происходит только в случае появления генетически постороннего элемента. Сбой распознавания приводит к выработке аутоиммунных антител, делящихся на свободно циркулирующие и связанные с тромбоцитами клетки.

Снижение тромбоцитов в крови и взаимосвязь с выработкой нужного количества антител может быть выявлена только путем лабораторных анализов.

Тестов международного стандарта на проверку количества антител не существует. Диагностирование выявляет:

  • аутоантитела;
  • аллоантитела;
  • количество антител обоих видов.

Причин для развития и появления антител несколько:

  • идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура;
  • аллоимммунная тромбоцитопения новорожденных;
  • снижение тромбоцитов, вызванное переливанием крови;
  • заболевание красной волчанкой;
  • ВИЧ-инфекция и другие виды болезней инфекционного характера.

Антитела делятся на: иммуноглобулины класса G и класса М.

Функции тромбоцитов и механизм их активизации

Взаимосвязь с составом крови

Антитела к тромбоцитам взаимосвязаны с качественным изменением элементов крови и костного мозга.

Связь антигенов с антителами приводит к ускоренному распаду тромбоцитов в селезенке и печени. Результатом дисбаланса количества элемента в этом случае может стать развитие тромбоцитопении либо тромбоцитопатии (нехватка тромбоцитов костного мозга).

Клинически сбой вызывает кровоточивость разной степени тяжести, начиная с мелкой сыпи, вызванной подкожными капиллярными кровоподтеками, до кровоизлияния в мозг. Направить на исследование больного врач может в случае:

  • развития частых, регулярно повторяющихся носовых кровотечений;
  • возникновении петехиальной сыпи;
  • повышенной кровоточивости десен;
  • если при прохождении клинического анализа крови обнаружено отклонение от нормы количества тромбоцитов;
  • при снижении числа тромбоцитов в крови ниже 150-100х10 9 л;
  • при развитии патологий костного мозга.

Выявить заболевание можно, применив непрямое исследование, во время которого на препаратном стекле фиксируется специфическое соединение иммуноглобулинов класса G с составом аллогенных тромбоцитов:

  • основная функция данных иммуноглобулинов – образование соединения антиген-антитело;
  • антитела появляются через определенный временной промежуток после контакта с антигенами;
  • имея небольшой молекулярный вес, проникают через плаценту к плоду при беременности;
  • способствуют пассивному иммунитету новорожденного к части инфекционных заболеваний;
  • собственные иммуноглобулины начинают формироваться у ребенка с 9 месяцев после рождения.

При помощи теста устанавливается:

  • наличие антител без разграничения;
  • трактовка полученных результатов анализа происходит в соответствии с клиническими наблюдениями за больным;
  • доскональное изучение теста позволяет выявить развитие сопутствующих заболеваний, внутренние кровотечения, болезни костного мозга или их отсутствие;
  • антитромбоцитарные антитела, присутствующие в организме людей, относятся к разным видам.

Анализ крови на антитела к тромбоцитам производится утром, натощак. Перед сдачей свести к минимуму физическое и психоэмоциональное возбуждение, временно исключить прием лекарственных препаратов.

Определить уровень содержания антител можно только посредством лабораторного анализа крови

Нормы показателей

Для здорового кроветворения необходима определенная норма тромбоцитов. Их активизация способствует быстрой остановке кровотечений и восстановлению стенок сосудов. При дисбалансе между воспроизведением новых клеток и отмиранием выработавших свой ресурс возникает опасность появления кровотечения либо тромбообразования.

Для разных возрастных категорий характерна отличающаяся норма тромбоцитов. Точное их количество не установлено. Варьируется в промежутках:

  • 100-420х10 9 /л у новорожденных;
  • 180-320х10 9 /л дети после года;
  • 150-380х10 9 /л беременные;
  • 180-320х10 9 /л взрослые.

При проверке показателей низкое число тромбоцитов может быть у женщин в период менструального цикла. Данные сбои быстро устраняются, и показатель возвращается в норму. В этом случае причиной нарушений являются временные кровотечения.

Разжижение крови, вызванное низким количеством вырабатываемых костным мозгом тромбоцитов, приводит к нарушению свертываемости, проблемам с кровоточивостью из-за потери эластичности стенок сосудов, их ломкости и хрупкости. Причины для обращения к специалисту:

  • длительное кровотечение после удаления зубов или при небольших разрезах;
  • возникающие по нескольку раз в течение месяца носовые кровотечения;
  • длительное менструальное кровотечение с большим количеством выделений;
  • частое безосновательное появление синяков на теле, говорящих о внутреннем кровотечении.

Возникновению нарушений способствует случаи:

  • аллергические реакции на лекарственные средства;
  • выработка организмом антитромбоцидных средств;
  • болезни костного мозга;
  • болезни, вызванные инфекционными заболеваниями, или симптоматические;
  • заболевания, проникающие к ребенку от больной женщины, трансиммунные.

Все случаи заболеваний, связанные с нарушением выработки количества тромбоцитов, лечатся как основные.

Аутоантитела к тромбоцитам (в крови)

Ключевые слова: аутоантитела тромбоцит пурпура гемостаз кровь

Аутоантитела к тромбоцитам – показатель в диагностике аутоиммунного поражения тромбоцитов, проявляющегося иммунной тромбоцитопенической пурпурой. Основные показания к применению: выяснение причин тромбоцитопении (снижение количества тромбоцитов в периферической крови); клинические признаки тромбоцитопенический пурпуры; геморрагический синдром с кожными проявлениями — петехии, пурпура, экхимозы; кровоизлияния в слизистые оболочки; кровотечения из слизистых — носовые, десневые, из лунки удаленного зуба; маточные кровотечения; мелена; гематурия.

Наиболее частой причиной повышенного разрушения тромбоцитов является иммунная тромбоцитопеническая пурпура. Пурпура тромбоцитопеническая может быть самостоятельным заболеванием — так называемая идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (болезнь Верльгофа). Встречается преимущественно у женщин, протекает часто с хроническим течением возникает, являясь результатом резкого уменьшения в крови тромбоцитов. Поскольку причина появления антител неизвестна, заболевание называют идиопатическим.

В генезе болезни важную роль играет образование аутоантител к тромбоцитам, которые обнаруживаются в сыворотке крови до 90% у пациентов с данным заболеванием. Образовавшиеся антитела связываются с тромбоцитами, приводя к нарушению их функции, преждевременному удалению и разрушению их в ретикулоэндотелиальной системе. Продолжительность жизни тромбоцитов снижается с нормальных 10 дней до нескольких часов.

Поскольку тромбоциты играют важную роль в процессах свертывания крови (образования кровяного сгустка), то в клинической картине заболевания будут преобладать геморрагические синдромы – появление кровоизлияний. Характерны несимметрично расположенные полиморфные геморрагии от мелких петехий до обширных подкожных кровоизлияний, возникающих спонтанно или под влиянием малейшей травмы. Возможно появление кровоточивости слизистых оболочек рта, носа, желудочно-кишечного тракта. Реже возникают легочные, почечные и маточные кровотечения. Основным лабораторным гематологическим признаком является тромбоцитопения. В ряде случаев отмечается умеренный лейкоцитоз, нейтрофилия. Ретракция кровяного сгустка снижена. Длительность кровотечения увеличена. Время свертывания нормальное.

Развитие пурпуры может быть и осложнением различных заболеваний: ВИЧ-инфекции и инфицировании вирусом Эпштейн-Барра, при системной красной волчанки, у больных хроническим лимфолейкозом. Образование антитромбоцитарных антител может быть спровоцировано в ряде случаев применением лекарств: некоторые антибиотики, диуретики, противовоспалительные препараты, сульфаниламиды, хинин , аналгетики.

Антитела к тромбоцитам, кровь

Тромбоциты – это форменные элементы крови, основной функцией которых в кровеносном русле является остановка кровотечений. Перенося на своей поверхности некоторые факторы свертывания, они участвуют в процессе гемостаза.

В ряде случаев в организме человека к тромбоцитам начинают образовываться антитела. Антитромбоцитарные антитела – иммуноглобулины класса G, вырабатываются преимущественно в селезенке и связываются со специфическими белками на поверхности тромбоцитов. Функции тромбоцитов, вступивших во взаимодействие с АТ-антителами, нарушаются, срок жизни их укорачивается, а общее число тромбоцитов в периферической крови снижается.

Выработка антитромбоцитарных антител может быть связана как с врожденным заболеванием или аутоиммунным процессом, так и с различными инфекциями, приемом некоторых групп лекарственных препаратов. В зависимости от этого антитела делятся на аллоиммунные и аутоиммунные.

У многих пациентов могут одновременно присутствовать разные типы антитромбоцитарных антител.

Скрининговый тест выявляет общее количество антител в крови (как аллоиммунных, так и аутоиммунных), без возможности их разграничить. Поэтому специфичности теста низка и по одним лишь результатам этого исследования нельзя поставить диагноз.

Результаты исследования следует интерпретировать в соответствии с клиническими наблюдениями и данными других лабораторных исследований.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к методам диагностики аутоиммунных заболеваний крови человека. Способ заключается в определении процентного содержания тромбоцитов, покрытых иммуноглобулинами классов G и M, с использованием проточной цитометрии. Способ позволяет повысить точность диагностики иммунной тромбоцитопении, определить тактику лечения и контролировать его эффективность.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к проточно-цитометрическому способу диагностики аутоиммунной тромбоцитопении. Для осуществления способа из периферической крови человека выделяют тромбоциты, окрашивают их мечеными моноклональными антителами к CD41, IgG, IgM человека и анализируют с помощью проточной цитометрии. Показатель аутосенсибилизации вычисляют как отношение числа IgG (IgM)-позитивных клеток к числу клеток, фиксирующих анти-CD41 антитела. Использование способа направлено на диагностику этиологии тромбоцитопении.

Снижение количества тромбоцитов в периферической крови человека может быть следствием воздействия ряда факторов, основными из которых являются образование аутоиммунных антитромбоцитарных антител, депрессия костномозгового кроветворения, диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови, сепсис, прием лекарственных средств, гемодилюция. Для решения вопроса о вовлечении иммунных механизмов в развитие тромбоцитопении необходимо определение аутоантител как фиксированных на поверхности клеток, так и циркулирующих в плазме крови. Результаты исследования применимы для определения тактики ведения больных и контроля эффективности кортикостероидной терапии.

Известен способ выявления антитромбоцитарных аутоантител иммуноферментным методом с нативными и модифицированными тромбоцитами (Зотиков Е.А., 2003). Однако использование данного метода для обнаружения аутоантител, фиксированных на собственных тромбоцитах больного, возможно только при числе тромбоцитов в периферической крови более 70×109/л. В то же время наибольшую диагностическую значимость имеет выявление аутоантител при низких значениях тромбоцитов в крови, т.к. именно эти состояния требуют медикаментозного лечения.

Известен способ определения антитромбоцитарных аутоантител, выполняющийся с помощью иммунофлуоресцентного теста с использованием сыворотки против иммуноглобулинов человека, меченой флуоресцирующим красителем (Катанджян Н.М., 1985). Недостатком метода является отсутствие автоматизации при оценке результатов исследования, что не исключает влияния субъективности.

Известен способ определения антител к тромбоцитам твердофазным методом (Capture-P) с образованием монослоя тромбоцитов с использованием специфического реагента Capture LISS и индикаторных эритроцитов. Недостатком данного способа является существенное затруднение при проведении исследования образцов крови больных с глубокой тромбоцитопенией (количество тромбоцитов в крови менее 20×109/л).

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ обнаружения антитромбоцитарных антител с помощью проточной цитометрии (Kohler М., 1996), при котором приготовленную суспензию тромбоцитов и лимфоцитов донора инкубируют с сывороткой крови реципиента, окрашивают моноклональными флуорисцентмечеными антителами и выявляют фиксированные на клетках антитела на проточном цитофлуориметре. Способ используется для определения иммунологической совместимости донора и реципиента по антигенам тромбоцитов и лимфоцитов перед трансфузией тромбоцитных концентратов. Данный способ, обладая высокой специфичностью и чувствительностью, позволяет получить результат в течение 2 часов, что имеет несомненное значение для практической трансфузиологии. Однако он применяется только для диагностики аллосенсибилизации больных и не предусматривает выявления антител аутологичной направленности.

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего выявлять фиксированные и циркулирующие в плазме крови антитромбоцитарные аутоантитела, принадлежащие к иммуноглобулинам классов G и M. Предлагаемый способ определения фиксированных и циркулирующих антитромбоцитарных аутоантител повышает точность диагностики аутоиммунной тромбоцитопении, что, в сою очередь, позволяет:

— назначать адекватную медикаментозную терапию;

— проводить контроль эффективности лечения;

— отслеживать момент возникновения рецидива заболевания.

Для достижения указанного результата в соответствии с прототипом из периферической крови выделяют суспензию тромбоцитов, окрашивают их мечеными антителами к CD41 и Anti-Human IgG и анализируют с помощью проточной цитометрии. В отличие от прототипа, в котором проводится выделение клеток крови доноров и определение аллоантител в сыворотке крови реципиента, в предлагаемом способе выделяют тромбоциты больного, добавляют аутосыворотку крови пациента и исследуют фиксированные и циркулирующие антитромбоцитарные аутоантитела. Оценку результата проводят в соответствии с разработанными критериями нормы. В отличие от прототипа выделенные тромбоциты дополнительно окрашивают мечеными антителами Anti-Human IgM, что необходимо для диагностики аутоиммунного заболевания в начальной стадии. Коэффициент аутосенсибилизации тромбоцитов определяют по соотношению числа Anti-Human IgG- (или Anti-Human IgM) позитивных тромбоцитов и числа клеток, фиксирующих CD41.

Способ осуществляется следующим образом:

Вариант 1

1. Выделение суспензии тромбоцитов: 3 мл венозной крови собирают в пробирки с антикоагулянтом. Кровь разбавляют в 2 раза раствором Хенкса (НПО «Микроген» ТУ 9385-088-1423783-08), затем ее наслаивают на эквивалентный объем фиколл-урографина (плотность 1,078) (Фиколл 400 NPS400, Урографин 76% N ЛС-001850) в силиконированную пробирку с коническим дном и центрифугируют 15 мин при 1200 g. Клетки из интерфазного кольца собирают, добавляют 10 мл раствора Хенкса и центрифугируют 5 мин при 700 g. Супернатант удаляют, а осадок ресуспензируют в растворе Хенкса, доводя концентрацию тромбоцитов до 4-6×105/мкл.

2. Маркируют пробирки для каждого пациента в расчете на три пробы (A, B, C). Полученную суспензию тромбоцитов вносят по 100 мкл в каждую пробу. В пробу с маркировкой «C» добавляют 100 мкл аутосыворотки пациента и инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Затем во все пробы добавляют по 5 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) (Биоло T), содержащего 0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) (Sigma). Центрифугируют 5 мин при 3000 g. Последнюю процедуру повторяют 2 раза. Осадок клеток ресуспензируют в 100 мкл PBS.

3. В пробирки первой пробы (А) вносят по 10 мкл моноклональных антител CD41-FITC (меченые флуоресцеинизотиоционатом) (Beckman Coulter IOTest pN IM0649V), в пробирки второй и третьей пробы (B, C) — по 100 мкл моноклональных антител Goat F(ab’)2 Anti-Human IgG-FITC, предварительно разведенных в PBS в соотношении 1:20. Пробы инкубируют в темноте 20 минут. Затем добавляют по 5 мл буфера PBS+BSA, и центрифугируют 5 мин при 3000 g. Последнюю процедуру повторяют.

4. Образцы анализируют на проточном цитофлуориметре, оснащенном двумя флуоресцентными каналами и лазером (длина волны 488 нм). Анализ клеток в образце проводят по трем параметрам: интенсивности прямого и бокового (бидиректного) светорассеяния (линейная шкала), флуоресценции FITC.

Полученные данные регистрируют в табличном виде. Анализ результатов осуществляют в следующем порядке. С помощью известных технических средств строят график распределения клеток по интенсивности светорассеяния и флуоресценции FITC. При анализе пробы «А» на графике выбирают регион неповрежденных тромбоцитов и определяют количество клеток, окрашенных моноклональными антителами к CD41. Далее анализируют тот же регион, но в пробах «B» и «C», определяя количество клеток, окрашенных моноклональными антителами Anti-Human IgG. В каждом образце анализируют 2×105 тромбоцитов.

Коэффициент аутосенсибилизации определяют как отношение числа клеток, окрашенных Anti-Human IgG, к числу CD41-положительных клеток.

Установлено, что у 95% здоровых лиц (доноров компонентов крови) значение фиксированных антител не превышает 2%, циркулирующих антител — 5%.

Вариант 2

В постановке вместо моноклональных антител Goat F(ab’)2 Anti-Human IgG-FITC используются антитела Mouse Anti-Human IgM-FITC (Clone UHB). Данный вариант, направленный на исследование аутоантител класса IgM, применяется при анализе крови пациентов, имеющих клиническую картину иммунной тромбоцитопении в остром периоде заболевания, у которых аутоиммунные антитромбоцитарные IgG антитела не выявляются.

Ниже приводятся клинические примеры.

Пример 1

Пациент С., 71 год. Обследование во время диспансеризации. Диагноз: тромбоцитопения неясной этиологии (количество тромбоцитов в периферической крови — 98×109/л). В таблице 1 приведен результат иммуногематологического исследования фиксированных и циркулирующих антитромбоцитарных аутоантител.

Заключение: Коэффициент аутосенсибилизации тромбоцитов соответствует значениям нормы. Данных за иммунную природу тромбоцитопении не получено.

Пример 2

Пациент А., 57 лет. Клинический диагноз: иммунная тромбоцитопения, впервые выявленная. Острое течение. Стационарное лечение с 15.03.10 по 30.03.10. Проводимая терапия: метипред по стандартной схеме. В таблице 2 приведен результат иммуногематологического исследования фиксированных и циркулирующих антитромбоцитарных аутоантител от 15.03.10.

Заключение: Выявлен высокий коэффициент аутосенсибилизации тромбоцитов без инкубации (4,9%) и после инкубации с аутосывороткой (42,8%), что характерно для тромбоцитопении иммунной этиологии.

В таблице 3 приведен результат иммуногематологического исследования фиксированных и циркулирующих антитромбоцитарных аутоантител от 30.03.10.

Заключение: Коэффициент аутосенсибилизии тромбоцитов соответствует значениям нормы. Получено иммуногематологическое подтверждение эффективности медикаментозной терапии.

Таблица 1
Проба Объект исследования Моноклональные антитела Количество MKA-позитивных клеток, % Коэффициент аутосенсибилизации
A Тромбоциты CD41 98,4
B Тромбоциты Anti-Human IgG 0,3 0,3
C Тромбоциты + аутосыворотка Anti-Human 0,04 0,04
Примечание. Количество тромбоцитов в периферической крови — 98×109/л.
Таблица 2
Проба Объект исследования Моноклональные антитела Количество MKA-позитивных клеток, % Коэффициент аутосенсибилизации
A Тромбоциты CD41 44,6
B Тромбоциты Anti-Human IgG 2,2 4,9
C Тромбоциты + аутосыворотка Anti-Human IgG 19,1 42,8
Примечание. Количество тромбоцитов в периферической крови — 5×109/л.
Таблица 3
Проба Объект исследования Моноклональные антитела Количество MKA-позитивных клеток, % Коэффициент аутосенсибилизации
A Тромбоциты CD41 89,9
B Тромбоциты Anti-Human IgG 1,2 1,3
C Тромбоциты + аутосыворотка Anti-Human IgG 1,4 1,6
Примечание. Количество тромбоцитов в периферической крови -200×109/л.

Список литературы:

3. G.F.Lucas and P.Metcalfe Platelet and granulocyte glycoprotein polymorphisms Transfusion Medicine, 2000, 10, 157-154

5. Головкина Л.Л., Кутьина, Пушкина Т.Д. и соавт. Гуморальный ответ на антигены тромбоцитов у больных заболеваниями системы крови при трансфузиях тромбоцитов. // Вестник гематологии. — 2009. — №2. — T.V. — С.13-14.

6. Зотиков Е.А., Бабаева А.Г., Головкина Л.Л. Тромбоциты и антитромбоцитарные антитела. — М.: Монолит, 2003. — 128 с.

7. Масчан А.А., Румянцев А.Г. Стимуляция продукции тромбоцитов: новый подход к лечению хронической иммунной тромбоцитопенической пурпуры. // Онкогематология. — 2009. — N1. — С.51-56.

8. Основы клинической иммунологии / Перевод с англ. — 5-е изд. — М: ГЭОТАР — Медия, 2008. — 416 с; ил.

9. Руководство по лабораторной гематологии / Б.Сисла; пер. с англ. Под общ. ред. А.И.Воробьева. — М.: Практическая медицина, 2011. — 352 с.: ил.

Способ определения аутоантител к тромбоцитам, включающий в себя выделение суспензии тромбоцитов, окраску моноклональными антителами и оценку на проточном цитофлуориметре, отличающийся тем, что для анализа используют собственные тромбоциты и сыворотку крови больного, причем в качестве маркеров аутоиммунного процесса используют антитела, относящиеся к иммуноглобулинам классов G и М, при этом коэффициент аутосенсибилизации тромбоцитов рассчитывают как отношение количества Anti-Human IgG/IgM-позитивных клеток к числу клеток, фиксирующих CD41: значение коэффициента аутосенсибилизации тромбоцитов более 2% без инкубации с аутосывороткой и более 5% после инкубации с аутосывороткой расценивают как наличие у пациента антитромбоцитарных аутоантител, фиксированных на клетках и/или циркулирующих в плазме крови.